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Cas9基因敲除服务

CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫机制。在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白即可，这为其能够广泛应用提供了便利条件[1]。

目前，来自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系统应用*为广泛。Cas9 蛋白（含有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA 两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。

由于PAM序列结构简单（5’-NGG-3’），几乎可以在所有的基因中找 到大量靶点，因此得到广泛的应用。CRISPR-Cas9系统已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞，是目前*高效的基因组编辑系统[1]。

通过基因工程手段对crRNA和tracrRNA进行改造，将其连接在一起得到sgRNA（single guide RNA）。融合的RNA具有与野生型RNA类似的活力，但因为结构得到了简化更方便研究者使用。通过将表达sgRNA的原件与表达Cas9的原件相连接，得到可以同时表达两者的质粒，将其转染细胞，便能够对目的基因进行操作

CRISPR与RNAi的区别：

方法   靶标   质粒构件   基因下调   基因敲除   基因定点突变或多点突变   基因组改变   遗传密码子改变   表型改变  

RNia(siRNA,shRNA   mRNA(转录水平）   简单   YES       NO   NO   NO   NO  

CRISPR   DNA序列（基因组水平）   简单       YES   YES   YES   YES   YES  

TALEN   DNA序列（基因组水平）   复杂       YES   YES   YES   YES   YES  

技术优势：                                                                          ※操作简单，靶向精确性更高。

※可实现对靶基因单个位点或多个位点同时敲除。

※也可同时对多个靶基因进行敲除。

※可应用于任何物种。

※CRISPR/Cas9系统是由RNA调控的对DNA的修饰，其基因修饰可遗传。

※拥有CRISPR/Cas9腺病毒/慢病毒系统，对分裂期和非分裂期细胞均有感染作用。

客户提供：

1.物种、基因名称或者基因ID；

2.提供靶细胞。